تهیه محیط کشت میکروبی
کشت میکروارگانیسم ها در آزمایشگاه
انواع میکروارگانیسم ها برای بقاء و ادامه رشد خود مانند تمامی موجودات زنده نیاز به مواد غذایی و فاکتور های محیطی مناسب مانند دما و اتمسفر و pH دارند.هود شیمیایی در آزمایشگاه برای مطالعه میکروارگانیسم هایی مانند باکتری ها و قارچ ها نیاز به محیط های کشت است. علاوه بر محیط های زیست طبیعی، میکروب ها توانایی زندگی در محیط های مصنوعی و ساخته شده که حاوی مواد غذایی مورد نیاز میکروارگانیسم ها باشد را دارند که به آن محیط کشت می گویند. زمانی که غلظت میکروارگانیسم کم باشد با انجام کشت، تعداد آن ها را می توان افزایش داد. تهیه محیط کشت میکروبی یکی از فرایند های مهم و اولیه در آزمایشگاه های زیستی است.
این مقاله روش تهیه محیط کشت میکروبی را مورد بررسی قرار می دهد.
منظور از محیط کشت میکروبی چیست؟
محیط های کشت آزمایشگاهی در واقع محلول، سوسپانسیون یا مخلوطی حاوی مواد غذایی مورد نیاز برای رشد میکروب ها و میکروارگانیسم ها هستند.
انواع محیط کشت از نظر فیزیکی
- محیط های کشت جامد آگار
- محیط های کشت نیمه جامد
- محیط کشت مایع
انواع محیط های کشت از نظر نوع مواد تشکیل دهنده و کاربرد آن ها
- محیط کشت پایه (Basic Media):
- محیط کشت غنی شده (Enrichment Media):
- محیط کشت انتخابی (Selective Media)
- محیط کشت افتراقی (Defferential Media)
- محیط کشت اختصاصی (Special Media)
- محیط کشت انتقالی (Transport media)
کشت میکروارگانیسم ها در آزمایشگاه چه شرایطی نیاز دارد؟
کشت میکروب ها زیر هود لامینار انجام می شود. شرایط کشت برای هر نوع از سلول ها و میکروارگانیسم ها بسیار متفاوت است. اما محیط مصنوعی که در آن سلولها کشت میشوند همواره شامل یک ظرف مناسب حاوی بستر یا محیطی است که مواد مغذی ضروری (اسیدهای آمینه، کربوهیدراتها، ویتامینها، مواد معدنی)، فاکتورهای رشد، هورمون ها را تنظیم و گازها (O2، CO2) و محیط فیزیکوشیمیایی (pH، فشار اسمزی، دما) را تنظیم می کند. کشت میکروارگانیسم روی محیط های کشت در انکوباتور انجام می شود.
شرایط محیطی و مواد غذایی برای کشت میکروارگانیسم ها شامل چه مواردی است؟
- منبع کربن: مانند انواع قند هاف اسید های چرب و الکل های مختلف
- منبع نیتروژن: مانند نمک های آمونیوم، پپتون و تریپتون
- ترکیبات نمکی مثل NaCl
- نمک های ایجاد کننده حالت بافری: مانند KH2PO4، K2HPO4 و Na2HPO4
- فاکتور های رشد مانند پورین ها، پیریمیدین ها و ویتامین ها
- معرف های pH که با تغییر رنگ آن ها می توان به اسیدی یا قلیایی بودن محیط پی برد مانند فنل رد در محیط مانیتول سالت آگار
البته الزاما همه موارد فوق در محیط های کشت وجود ندارند و بسته به نوع میکروب ترکیبات موجود در محیط کشت متفاوت هستند.
دستگاه ها و تجهیزات مورد نیاز برای تهیه محیط کشت میکروبی و کشت میکروارگانیسم ها در آزمایشگاه
- هود لامینار
- انکوباتور
- اتوکلاو
- بن ماری
- سانتریفیوژ
- یخچال آزمایشگاهی
- pH متر
- میکروپیپت
- پلیت
- لوله کشت
- جا لوله ای
- شعله یا هات پلیت
- لوپ یا آنس